要素省略的發(fā)明是指“省去已知產(chǎn)品或者方法中的某一項或多項要素的發(fā)明”?！秾＠麑彶橹改稀罚?010年版，簡稱《指南》）對于該類發(fā)明創(chuàng)造性的判斷標準為：
（1）如果省去一項或多項要素后其功能也相應(yīng)地消失，則該發(fā)明不具備創(chuàng)造性；
（2）如果發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比省去一項或多項要素（例如，一項產(chǎn)品發(fā)明省去了一個或多個零部件或者一項方法省去一步或多步工序）后，依然保持原有的全部功能，或者帶來預(yù)料不到的技術(shù)效果，則具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步，該發(fā)明具備創(chuàng)造性。
一項申請日為2024年01月18日的發(fā)明專利申請，其權(quán)利要求1如下：1、一種擴增甲型流感病毒全基因組的引物，其特征在于，所述的引物序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示；所述的引物通過一步完成全部的逆轉(zhuǎn)錄及擴增流程。針對本發(fā)明所下達的第一次審查意見引用的對比文件及意見如下：
對比例文件1：CN105886494A
公開日期為2015-01-14
對比文件1公開了：
一種擴增甲型流感病毒全基因組的引物，反轉(zhuǎn)錄引物為針對所有亞型流感病毒8個節(jié)段的特異引物，序列為5'-AGCRAAAGCAGG-3'，R代表A或G堿基；PCR擴增引物為針對所有亞型流感病毒8個節(jié)段的特異引物，序列為：
（1）經(jīng)比對，本申請SEQ ID NO.1所示的FluA-F中的序列匹配部分包含在對比文件1的序列1中的下劃線部分中，本申請SEQ ID NO.2所示的FluA-R中的序列匹配部分包含在對比文件1的序列2的下劃線部分中。對比文件1還教導(dǎo)了，引物的5’端可以進行序列改變。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠想到設(shè)計其他的 5’端序列，也可根據(jù)實際需求適當改變引物匹配部分的長度。并無證據(jù)表明，本申請所述的引物能夠取得預(yù)料不到的技術(shù)效果。（2）公知常識文件1（“分子診斷學(xué)”，李偉等，第67頁，公開日期：2019-12-31）公開了，有人將反轉(zhuǎn)錄和 PCR 過程合二為一，即在同一體系中加入反轉(zhuǎn)錄酶、反轉(zhuǎn)錄引物、Taq DNA 聚合酶、PCR 引物、dNTP 和緩沖液，直接以 mRNA 為模板進行反轉(zhuǎn)錄和 PCR 擴增，稱為一步法 RT-PCR。由此可見，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠想到采用一步法進行RT-PCR，且能夠預(yù)期該方法對于擴增低豐度的 mRNA、構(gòu)建 cDNA 文庫具有較好的技術(shù)效果。
采用生物信息學(xué)方法，與各型別的甲型流感病毒參考基因組進行比對組裝，基因組全長為113432 bp，然后計算每個基因組位點的覆蓋深度（即為每個位點被多少條測序片段覆蓋），統(tǒng)計測序深度在30×以上基因組位點數(shù)量為x bp，覆蓋度=x/113432×100%，針對各亞型覆蓋度均≥99.9%，大于平均深度的20%的全序覆蓋度均能達到88%以上，擴增效率均一。其中，Ct32的樣本100X深度均能達到覆蓋度99%以上，說明該技術(shù)方法有很好的檢測靈敏性和準確性。結(jié)果見下表3：
對比文件1的技術(shù)效果：
對比文件1所述引物可以獲得完整的病毒8個基因節(jié)段的序列，有較好的測序覆蓋率見圖 3。
由圖3可知，在NA基因的部分區(qū)域覆蓋度極低，整體的覆蓋均一性較差。
由于對比文件1采用的是反轉(zhuǎn)錄、PCR擴增2個步驟完成，又由于圖3無法顯示覆蓋率的具體數(shù)值，因此，在效果上無法直接對比。鑒于此，申請人補充以下實驗（對比例3）：采用對比文件1的PCR擴增引物，利用本發(fā)明實施例1和實施例2的方法，對臨床上確認了感染了H1N1的甲型流感患者咽拭子樣本進行測序，結(jié)果如下：
以上結(jié)果表明，采用對比文件1的擴增引物，不能均一度較高的獲得樣本全基因組序列，容易出現(xiàn)擴增不均一導(dǎo)致最終測序后全序組裝無法獲得完整全基因組序列，部分序列丟失或者深度極低導(dǎo)致結(jié)果準確度不可信。因此，對比文件1中的一對擴增引物并不能獲得完整全基因組序列，其性能顯著不如本發(fā)明的引物SEQ ID NO .1-SEQ ID NO .2。
另外，本發(fā)明對比例1-2的數(shù)據(jù)結(jié)果也證實了，本發(fā)明引物SEQ ID NO .1-SEQ ID NO .2的擴增效果最優(yōu)。對比文件1采用的是反轉(zhuǎn)錄、PCR擴增2個步驟完成全基因組擴增，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說可以通過對引物序列的常規(guī)調(diào)整優(yōu)化擴增方法，但也是在2個步驟上進行的優(yōu)化，而本發(fā)明直接將兩個步驟合二為一，利用一對引物就做到了甲流全基因8節(jié)段序列均能夠均勻擴增，還提高全序列的覆蓋度，這是本領(lǐng)域的技術(shù)人員無法預(yù)料的。本發(fā)明不論是擴增方法還是擴增結(jié)果均取得了質(zhì)的飛躍，相較于對比文件1具有顯著的進步。并且申請人還驗證了對比文件1的一對擴增引物無法達到本發(fā)明的技術(shù)效果，因此，本發(fā)明相較于對比文件1減少了擴增步驟，對比文件1沒有給出技術(shù)啟示。對于本發(fā)明來說，將反轉(zhuǎn)錄、PCR擴增縮減為一步，依然實現(xiàn)了甲流全基因8節(jié)段序列均勻擴增，并且提高了全序列的覆蓋度，則本發(fā)明具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步，該發(fā)明具備創(chuàng)造性。以上雖然力證了本發(fā)明的技術(shù)方案相較于對比文件1產(chǎn)生了預(yù)料不到的技術(shù)效果，但為了進一步說明本發(fā)明的技術(shù)方案優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)，還需對審查意見中的關(guān)鍵性問題進行針對性答復(fù)或解釋。對審查意見（1）-（2）進行針對性答復(fù)：
※ 針對審查意見中（1）申請人持不同意見，具體陳述如下：
首先需要強調(diào)的是，下劃線序列為甲流8節(jié)段基因兩端的保守序列，為擴增全序均需要利用這一部分保守序列，但是序列的擴增能力及擴增均一性受到非下劃線序列影響，本發(fā)明實施例1與對比例1-2的效果均證明了該觀點。另外，利用對比文件1的引物、采用本發(fā)明的實驗方法也進一步證實了上述觀點。第三，本發(fā)明對比文件2引物（表4）的3'端與對比文件1完全相同，但在覆蓋度和均一性上完全不如本發(fā)明的實施例。以上均說明了并不是對引物5'端進行調(diào)整就可以產(chǎn)生本發(fā)明的技術(shù)效果，也證明了序列的擴增能力及擴增均一性受到非下劃線序列影響。
并且，由對比文件1的圖3可知，在NA基因的部分區(qū)域覆蓋度極低，整體的覆蓋均一性較差，就已經(jīng)證明了對比文件1的技術(shù)效果并不如本發(fā)明。對比例3的補充也只是為了說明對比文件1的引物即便是采用一步擴增的體系和方法依然達不到本發(fā)明的技術(shù)效果。該結(jié)論與本發(fā)明實施例與對比例2的結(jié)果一致。以上效果的對比均證明了，本發(fā)明相較于現(xiàn)有技術(shù)產(chǎn)生了預(yù)料不到的技術(shù)效果。※ 針對審查意見中（2）申請人持不同意見，具體陳述如下：
首先，本發(fā)明的技術(shù)方案是只使用一對引物實現(xiàn)擴增，而公知常識文件1中也記載了：將反轉(zhuǎn)錄和 PCR 過程合二為一，即在同一體系中加入反轉(zhuǎn)錄酶、反轉(zhuǎn)錄引物、Taq DNA聚合酶、PCR引物、dNTP和緩沖液。相較于本發(fā)明依然使用的是兩對引物，只是在一個體系進行擴增而已，與本發(fā)明的一對引物不同。因此，公知常識文件1中的一步法與本發(fā)明的技術(shù)方案存在實質(zhì)性區(qū)別的，對本發(fā)明不存在技術(shù)啟示。
綜上，本申請權(quán)利要求1相對于對比文件1具有突出的實質(zhì)性特點及顯著的進步，具備創(chuàng)造性。該案件已授權(quán)。
小結(jié)：
1.縮略發(fā)明要與現(xiàn)有技術(shù)存在實質(zhì)性的區(qū)別
2.效果與現(xiàn)有技術(shù)相當或超越現(xiàn)有技術(shù)
